中国预防兽医学报 /oa 2017年我国输入性北美1-7-4分支PRRSV的基因组序列分析 /oa/darticle.aspx?type=view&id=20181001 为揭示我国猪场中的新发猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的基因组特征及起源,本研究对辽宁省两个发病猪场检测到的两株1-7-4分支PRRSV (LNWK96和LNWK130)进行遗传演化及测序分析。遗传演化分析显示,两株1-7-4分支PRRSV在我国PRRSV基因分群中属于一个新亚群,即第7亚群。对LNWK96株进行了全基因组序列分析显示,与我国分离的PRRSV株的核苷酸同源性为82.3 %~84.9 %,与美国分离的1-7-4分支IA/2014/NADC34株的同源性最高为96.1 %。重组分析显示LNWK96株是以1-7-4分支的病毒为母本株,ISU30和NADC30病毒株提供重组片段的重组病毒。推测该两株PRRSV极有可能是来自北美的输入性1-7-4分支PRRSV。本研究首次报道1-7-4分支的PRRSV在我国出现,该类病毒株在我国的流行趋势值得关注,其致病性及当前疫苗的保护效果需要进一步研究。 <br />  2018年11月15 00:00 2018年10 875 879 0 &nbsp; <p>张洪亮<sup>1†</sup>,张文立<sup>1†</sup>,相丽润<sup>1</sup>,刘春晓<sup>1</sup>,宋帅杰<sup>1</sup>,汤艳东<sup>1</sup>,冷超粮<sup>2</sup>,彭金美<sup>1</sup>,王 倩<sup>1</sup>,<br />安同庆<sup>1</sup>,童光志<sup>3*</sup>,蔡雪辉<sup>1*</sup>,田志军<sup>1*<br /></sup></p> &nbsp; <p>猪源伪狂犬病病毒变异株AH02LA株细菌人工染色体的构建与鉴定</p><p></p> /oa/darticle.aspx?type=view&id=20181002 &nbsp; <p>为构建猪源伪狂犬病病毒(PRV)变异株AH02LA的细菌人工染色体(BAC),本研究将转移载体pHA2-pUC19-H1-H2的DNA与PRV AH02LA株基因组DNA共转染鸡胚成纤维细胞(CEF)进行同源重组,利用转移载体中的GFP 为筛选标记,获得携带GFP 基因的gE/gI 基因缺失突变株PRV-AH02LA(gE-/gI-)-pHA2。提取纯化的该重组病毒DNA转化E.coli DH10B,对获得的阳性克隆命名为BACPRV-G。提取BACPRV-G的DNA,将含gE、gI和其上下游同源片段的DNA与BACPRV-G的DNA共转染CEF,获得gE、gZ基因恢复的病毒命名为PRV- AH02LARec。比较亲本株PRV AH02LA、基因缺失株和恢复株的生长动力学,结果表明,恢复株的生长特性与亲本株无显著差异。本研究成功构建了PRV变异株AH02LA的 BAC,并证实其为全基因组的感染性克隆,为PRV变异株的致病机理研究和新型疫苗研制提供了重要的平台。 </p><p> </p> 2018年11月15 00:00 2018年10 880 885 0 &nbsp; <p>刘娅梅<sup>1</sup>,乔永峰<sup>1</sup>,顾一奇<sup>1, 2</sup>,柳 畅<sup>1, 2</sup>,许梦微<sup>1, 2</sup>,王志胜<sup>1</sup>,郭容利<sup>1</sup>,</p><p>张传建<sup>1</sup>,侯继波<sup>1</sup>,王继春<sup>1*</sup></p> &nbsp; <p>2012年~2016年广东省猪丁型冠状病毒的流行病学调查及分析</p><p></p> /oa/darticle.aspx?type=view&id=20181003 &nbsp; <p>为调查广东省猪丁型冠状病毒(PDCoV)的流行情况,本研究对2012年~2016年采集的420份猪腹泻病料样品进行RT-PCR检测,并对其中一株PDCoV (PDCoV/CHGD/2016)进行全基因组扩增、测序及遗传进化分析。RT-PCR检测结果显示,PDCoV的阳性率为13.33 %,PDCoV/猪流行性腹泻病毒混合感染率为5.95 %。基因测序显示PDCoV/CHGD/2016全基因组长度为25 419 bp。全基因同源性分析显示PDCoV/CHGD/2016与3个中国病毒株(PDCoV/CHJXNI2/2015、CHN-JS-2014、CHN-HB-2014)的同源性最高,达99.4 %,与两个泰国病毒株的同源率最低,为97.4 %;S蛋白氨基酸同源性分析显示,PDCoV/CHGD/2016与其它PDCoV株间的同源率为95.9 %~99.3 %,其中与PDCoV/CHJXNI2/2015同源率最高,与泰国株的同源性最低。全基因组序列和S蛋白氨基酸序列系统进化树结果表明,PDCoV/CHGD/2016与PDCoV形成一个小的分支,亲缘关系相近,而与鸟丁型冠状病毒亲缘关系较远。本研究为后续PDCoV的诊断防控、病毒学研究提供参考和数据依据。 </p><p>  </p> 2018年11月15 00:00 2018年10 886 890 0 &nbsp; <p>宋亚兵<sup>1</sup>,徐帅飞<sup>1</sup>,苏丹萍<sup>1</sup>,石 坚<sup>1</sup>,贺东生<sup>1,2*</sup></p> &nbsp; <p>河南地区麻种鸡死胚中沙门菌的分离鉴定与耐药性分析</p><p></p><br /> /oa/darticle.aspx?type=view&id=20181004 &nbsp; <p>为了解麻鸡死胚中沙门菌的感染和耐药状况,本研究于2014年9月~2015年8月采集河南省郑州、平顶山、漯河、商丘地区4个父母代麻鸡场孵化场死胚样品,进行沙门菌分离、血清型鉴定,并用纸片法和PCR方法对菌株耐药表型及相关耐药基因进行检测。结果显示,695份死胚样品共分离到263株沙门菌,分离率为37.8 %。包括9种血清型:鸡白痢沙门菌203株、爱丁堡沙门菌17株、汤卜逊沙门菌14株、塞罗沙门菌13株、田纳西沙门菌9株、吉姆皮斯Ⅱ沙门菌4株、加瓦尼沙门菌1株、泰米尔纳德沙门菌1株、恩德培Ⅱ沙门菌1株。其中有两个鸡场样品禽副伤寒沙门菌分离率超过鸡白痢沙门菌。263株沙门菌对磺胺异噁唑(69.6 %,183/263)、氨苄西林(40.7 %,107/263)、四环素(35.7 %,94/263)、土霉素(35.4 %,93/263)、磺胺甲噁唑/甲氧苄啶(34.2 %,90/263)的耐药较严重,且26.2 % (69/263)的菌株表现为多重耐药;所有分离株对多粘菌素E、亚胺培南、美罗培南敏感;不同种鸡场来源的沙门菌耐药情况差异较大;用PCR方法共扩增到15种耐药基因,且检出的5类耐药基因与耐药表型的符合率在81.6 %以上。本研究结果为制订种鸡群沙门菌病综合防控措施提供了参考。 </p> 2018年11月15 00:00 2018年10 891 896 0 &nbsp; <p>徐耀辉<sup>?*</sup>,齐亚如<sup>?</sup>,邓同炜,卢建洲,陈 益,张 冲,刘永元,仝官云,邢玉玲</p> &nbsp; <p>鸭瘟病毒疫苗株基因组复制非必需区的筛选</p><p></p> /oa/darticle.aspx?type=view&id=20181005 &nbsp; <p>为探寻鸭瘟病毒(DEV)基因组中的复制非必需区,本研究在已建立的DEV疫苗株5粘粒拯救系统的基础上,利用转座子随机插入技术,将含eGFP表达框架的基因片段随机插入DEV US区,救获两株表达绿色荧光蛋白的重组DEV (rDEV-us7eGFP、rDEV-us8us1eGFP)。将两株重组病毒在鸡胚成纤维细胞中连续传至20代后,通过PCR、荧光表达鉴定分析,结果显示gfp基因能够在重组病毒中稳定存在并正确表达;生长动力学结果表明,重组病毒在CEF中的增殖效率与DEV疫苗株无显著差异。攻毒保护实验结果表明,将rDEV-us7eGFP和rDEV-us8us1eGFP以105 TCID50的剂量免疫SPF鸭后,其对鸭瘟强毒攻击的保护效率与DEV疫苗株一致,均为100 %。本研究成功筛选到DEV基因组中的两个可供外源基因插入的复制非必需区,分别位于us7基因内部及us8与us1基因之间,为以DEV为载体构建相关重组疫苗奠定了重要基础。</p><p>  </p> 2018年11月15 00:00 2018年10 897 901 0 &nbsp; <p>胡玉珍,陈普成,丁蕾蕾,赵玉博,姜永萍,陈化兰,柳金雄*</p> &nbsp; <p>一种用于Red同源重组的正反筛选表达盒的构建及其反向筛选性能分析</p><p></p><br /> /oa/darticle.aspx?type=view&id=20181006 &nbsp; <p>为建立能够应用于大肠杆菌基因无痕敲除的方法,本研究分别从大肠杆菌TG1基因组和pKD13质粒中扩增出链霉素敏感基因(strS,即rpsL基因)和卡那抗性基因(kanR),采用重叠延伸PCR方法将strS基因和kanR基因拼接,并将拼接片段分别克隆于pMD18-T和pBAD33载体中,再以重组载体为模板,以带有flgK基因同源臂的引物扩增获得PlacstrS-kanR打靶片段和ParastrS-kanR打靶片段,然后结合Red重组技术构建了相应的flgK基因敲除菌株placSK-ΔflgK/TOP10和paraSK-ΔflgK/TOP10,并通过链霉素最小抑菌浓度(MIC)试验检测两种筛选系统的反向筛选性能。结果显示,野生型TOP10菌株、placSK-ΔflgK/TOP10菌株和paraSK-ΔflgK/TOP10菌株的链霉素MIC值分别为8 000 μg/mL、2 000 μg/mL和500 μg/mL。表明采用两种筛选系统构建的敲除菌株均有一定的链霉素敏感表型,具有反向筛选的能力,但含Para启动子的筛选系统反向筛选性能更好。本研究建立了可用于大肠杆菌Red重组技术的反向筛选系统,为获得更有效的Red重组筛选工具提供了依据。</p><p>  </p> 2018年11月15 00:00 2018年10 902 907 0 &nbsp; <p>刘金泽,刘云惠,余子豪,李永霞,王明晓,张远星,李统战,李倩文,余旭平*</p> &nbsp; <p>禽偏肺病毒通用型EvaGreen 荧光定量RT-PCR检测方法的建立</p><p></p> /oa/darticle.aspx?type=view&id=20181007 &nbsp; <p>为建立各亚型禽偏肺病毒(aMPV)的快速检测方法,本研究对aMPV 4个亚型的核苷酸序列比对分析,针对aMPV N基因的保守区域设计了一对特异性引物,通过条件优化,建立了检测aMPV各亚型的通用型EvaGreen荧光定量 RT-PCR方法。结果显示,该方法在模板为103拷贝/μL~108拷贝/μL范围内具有良好的线性关系;检测下限为103拷贝/μL,敏感性为常规RT-PCR的10倍。与其它常见禽类病毒无交叉反应;组内重复试验和组间重复试验的变异系数分别为0.89 %~1.34 %和2.01 %~3.29 %,具有较好的重复性。利用所建立的方法对河南省部分地区鸡场送检病鸡样品进行检测,结果显示被检地区鸡场的aMPV的平均阳性率为46.66 %,与普通RT-PCR的符合率为100 %。本研究建立的EvaGreen 荧光定量RT-PCR方法可以用于aMPV的检测,为aMPV感染的流行病学调查提供了可行方法。</p><p>  </p> 2018年11月15 00:00 2018年10 908 912 0 &nbsp; <p>王贝贝,吴艳阳,高冬生,刘延珂,万文妍,杨宁霞,王新卫*,赵 军*</p> &nbsp; <p>猪圆环病毒2型和3型双重PCR检测方法的建立与应用</p><p></p> /oa/darticle.aspx?type=view&id=20181008 &nbsp; <p>为建立一种快速且同时检测猪圆环病毒2型(PCV2)和3型(PCV3)的方法,本研究根据GenBank中PCV2和 PCV3的全基因组序列,设计了两对特异性引物,通过对扩增条件的优化,建立了能够同时检测PCV2和PCV3的双重PCR方法。该方法可以同时扩增PCV2的266 bp和PCV3 的594 bp特异性片段,而对猪伪狂犬病毒、猪细小病毒、猪瘟病毒、猪繁殖障碍与呼吸综合征病毒和猪流行性腹泻病毒的基因组扩增结果均为阴性。对PCV2和PCV3的最低检出量均为100拷贝/μL。对广西境内100份健康屠宰猪淋巴结样品检测结果显示,单一PCR与双重PCR检测符合率为100 %。结果表明,本研究建立了一种简便快捷、反应灵敏、稳定可靠且特异性强的双重PCR技术,为临床样品中PCV2和PCV3的快速检测提供了有效的技术支持。</p><p>  </p> 2018年11月15 00:00 2018年10 913 916 0 &nbsp; <p>季程远,王蔚怡,黄 欣,方庆励,欧阳康,陈 樱,韦祖樟,黄伟坚*</p> &nbsp; <p>支气管败血波氏杆菌SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法的建立</p><p></p> /oa/darticle.aspx?type=view&id=20181009 &nbsp; <p>为建立支气管败血波氏杆菌SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法,本研究根据波氏菌属毒力基因DNT设计一对特异性引物,通过优化,确定最佳反应条件,建立了支气管败血波氏杆菌荧光定量 PCR 检测方法。并对其进行敏感性、特异性、重复性试验以及临床样品的检测。以支气管败血波氏杆菌标准质粒为模板,建立标准曲线结果显示:标准品浓度在1.13×108拷贝/μL~1.13×102 拷贝/μL范围内具有良好的线性关系,相关数R2=0.997;该方法的灵敏度可达1.13×101拷贝/μL。建立的荧光定量PCR方法与副猪嗜血杆菌、猪链球菌、金黄色葡萄球菌等 12 种细菌和伪狂犬病毒、猪瘟病毒等4种病毒无交叉反应,具有良好的特异性;批内变异系数(CV)均小于 2 % ,批间变异系数均小于4 %,具有良好的稳定性。对临床样品的检测结果显示该方法检测的阳性率为57.7 %,与普通PCR的符合率为93.24 %。本研究建立的方法可以用作支气管败血波氏杆菌感染的早期诊断、快速检测与定量分析。</p><p>  </p> 2018年11月15 00:00 2018年10 917 921 0 &nbsp; <p>尹清清<sup>1,2</sup>,德西措姆<sup>3</sup>,罗怡琳<sup>1,2</sup>,邬旭龙<sup>1,2</sup>,张鹏飞<sup>1,2</sup>,杨泽晓<sup>1</sup>,姚学萍<sup>1</sup>,王 印<sup>1,2*</sup></p> &nbsp; <p>牛病毒性腹泻病毒和牛传染性鼻气管炎病毒双重荧光定量PCR检测方法的建立</p><p></p> /oa/darticle.aspx?type=view&id=20181010 &nbsp; <p>为建立牛病毒性腹泻病毒(BVDV)和牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV) TaqMan双重荧光定量PCR检测方法,本研究根据GenBank中已登录的BVDV 5’-UTR基因序列和IBRV gB基因序列,设计了2对特异性引物和2条TaqMan探针。结果显示以含有BVDV 5’-UTR基因和IBRV gB基因的重组质粒为模板绘制的标准曲线,其相关系数(R2)均大于 0.990,线性关系较好。特异性试验结果显示,该方法仅对BVDV和IBRV 检测为阳性,而对口蹄疫病毒、牛流行热病毒、牛副流感病毒、牛轮状病毒、牛巴氏杆菌、猪瘟病毒、牛支原体、牛、羊布鲁氏菌检测结果均为阴性,表明其特异性强。该方法的检测下限约为10拷贝/μL,重复性试验结果显示该方法的组内和组间变异系数均小于2 %,利用OIE采纳的BVDV、IBRV荧光定量 PCR 方法与本实验建立的方法分别对47份牛病料样品进行检测,二者对BVDV和IBRV检测的符合率分别可达97.87 %和100 %。研究表明所建立的荧光定量PCR方法具有快速、敏感、准确等优点,可以用于BVDV和IBRV的双重定量检测。</p> 2018年11月15 00:00 2018年10 922 925 0 &nbsp; <p>张贵刚<sup>1,2?</sup>,王艳杰<sup>1,2?</sup>,陈君彦<sup>1,2</sup>,范秀丽<sup>1,2</sup>,魏学峰<sup>1,2</sup>,刘国英<sup>1,2*</sup></p> &nbsp; <p>基于重组酶聚合酶扩增技术的犬细小病毒快速检测方法的建立</p><p></p> /oa/darticle.aspx?type=view&id=20181011 &nbsp; <p>为建立一种快速、简便检测犬细小病毒(CPV)的方法,本研究基于CPV VP2基因的保守序列,设计合成引物,通过对反应条件的优化,建立了CPV的重组酶聚合酶(RPA)检测方法。该方法在38 ℃恒温反应15 min即可快速、特异性的检测出CPV。特异性试验结果显示,除CPV (BJ-2b株、BJ-2c株)外,犬瘟热病毒、犬冠状病毒、犬腺病毒、犬副流感病毒等检测均为阴性;敏感性试验结果显示,以重组质粒pEASY-CPV-VP2为模板,RPA的检测下限为1×101拷贝/μL,其敏感度比普通PCR方法高10倍。利用建立的RPA方法对疑似CPV感染的临床样品的阳性检出率为88 %,高于普通PCR的检出率(82 %)和胶体金的检出率(76 %)。本研究建立的CPV RPA检测方法操作简单,反应灵敏,结果确实可靠,适用于CPV的快速检测。 </p><p>  </p> 2018年11月15 00:00 2018年10 926 929 0 &nbsp; <p>姜一曈,王昭华,鑫 婷,贾 红,郭晓宇,朱鸿飞*,侯绍华*</p> &nbsp; <p>Clade 2.3.2e H5亚型禽流感DNA疫苗的免疫保护效力研究</p><p></p> /oa/darticle.aspx?type=view&id=20181012 &nbsp; <p>为研制和更新针对H5亚型禽流感病毒(AIV)流行株的DNA疫苗,本研究将新近分离的H5亚型AIV Clade2.3.2e分支代表株A/Duck/Anhui/S1246/2015 (DK/AH/S1246/15)密码子优化的HA基因定向克隆至载体pCAGGS中构建重组质粒 pCA-S1246,将该质粒转染293T细胞。利用间接免疫荧光和western blot检测,结果显示,HA蛋白可以在293T细胞中正确表达。将15 μg、30 μg和60 μg的pCA-S1246质粒分别免疫3周龄的SPF鸡,3周以后以相同的剂量加强免疫后1周,检测其HI抗体平均效价分别可达1∶56、1∶16和1∶37;加强免疫1周后用105 EID50的DK/AH/S1246/15进行攻击时,免疫组的保护率为100 %。本研究为DNA质粒pCA-S1246作为防控Clade.2.3.2e AIV的候选DNA疫苗株提供了实验依据。</p><p>  </p> 2018年11月15 00:00 2018年10 930 933 0 &nbsp; <p>潘俊慧,梁真洁,陈普成,唐 猛,曾显营,柳金雄,邓国华,姜永萍*,陈化兰*</p> &nbsp; <p>口蹄疫灭活病毒配合枯草芽孢杆菌对提高牛呼吸道先天免疫力的研究</p><p></p> /oa/darticle.aspx?type=view&id=20181013 &nbsp; <p>本研究采用O型口蹄疫灭活病毒配合枯草芽孢杆菌喷鼻气雾免疫健康牛,并设单独使用枯草芽孢杆菌组、灭活病毒、常规疫苗免疫组和空白对照组,评价O型口蹄疫灭活病毒配合免疫增强剂枯草芽孢杆菌通过喷鼻气雾免疫健康牛对其呼吸道先天免疫力的影响。通过免疫组织化学染色显示,免疫后灭活病毒配合免疫增强剂试验组牛鼻黏膜与肺内支气管黏膜中TLR7的表达和CD3+淋巴细胞呈极显著增多(p&lt;0.01);而常规口蹄疫灭活苗对其TLR7的表达和CD3+淋巴细胞数量的影响不显著(p&gt;0.05)。ELISA检测结果显示,与对照组相比,灭活病毒配合免疫增强剂试验组牛呼吸道组织中IL-12水平呈极显著增加(p&lt;0.01),IL-4和IL-10水平无明显差异(p&gt;0.05);而常规口蹄疫灭活苗对牛呼吸道组织中IL-4、IL-10和IL-12的影响不明显(p&gt;0.05)。表明O型口蹄疫灭活病毒配合枯草芽孢杆菌能够提高牛呼吸道先天免疫力。本研究为研发口蹄疫灭活病毒的鼻腔疫苗提供重要的试验数据和参考。</p><p>  </p> 2018年11月15 00:00 2018年10 934 939 0 &nbsp; <p>李乙江<sup>1,2</sup>,张泉鹏<sup>3</sup>,苗海生<sup>4</sup>,段体祥<sup>5</sup>,张应国<sup>6</sup>,杨柱昌<sup>7</sup>,李世钰<sup>8</sup>,冯德正<sup>9</sup>,陈德寿<sup>10</sup>,</p><p>雷锦文<sup>11</sup>,高花英<sup>1</sup>,鲍晓伟<sup>4</sup>,李作生<sup>12</sup>,杨 倩<sup>2*</sup></p> &nbsp; <p>牛副结核分枝杆菌多组分亚单位疫苗的初步研究</p><p></p> /oa/darticle.aspx?type=view&id=20181014 &nbsp; <p>为筛选出最佳的预防副结核病的候选疫苗,本研究评价了副结核分枝杆菌(MAP)培养上清、MAP细胞壁和MAP灭活菌体的免疫保护效果。将160只6周龄雌性BALB/c小鼠随机分为8组,每组20只,分别为PBS组、菌影(Ghost)组、弗氏不完全佐剂(IFA)组、上清+Ghost组、上清+IFA组、细胞壁+Ghost组、细胞壁+IFA组和灭活苗组,分别经皮下注射免疫后在不同的时间点采集小鼠尾静脉血,利用间接ELISA检测小鼠血清中抗体效价。三免后以5×108 cfu/只剂量进行腹腔攻毒。结果显示:细胞壁+IFA组小鼠的抗体水平明显高于其它组(p&lt;0.001),细胞壁+Ghost组次之(p&lt;0.001);除阴性对照组外,各组小鼠IgG1的滴度均高于IgG2a (p&lt;0.001);细胞壁+IFA组和细胞壁+Ghost组的小鼠脾脏淋巴细胞培养上清中IFN-γ、IL-4和IL-10的含量显著高于其它实验组(p&lt;0.001);细胞壁+IFA组IL-2的含量明显高于其它实验组(p&lt;0.001),细胞壁+Ghost组次之(p&lt;0.01);细胞壁+IFA组小鼠的肝脏、脾脏和小肠组织的荷菌量显著少于其它实验组(p&lt;0.01),细胞壁+Ghost组次之(p&lt;0.05),表明MAP细胞壁可以刺激机体产生较高水平的抗体,机体的免疫反应倾向于体液免疫,且细胞壁对攻毒小鼠的保护效果最好。本研究为反刍动物副结核病疫苗的研制提供了实验依据。</p><p>  </p> 2018年11月15 00:00 2018年10 940 944 0 &nbsp; <p>程玉笛,党光辉,李 鹤,李 哲,刘虹秀,宋宁宁,刘思国*</p> &nbsp; <p>IgG FcRn介导奶牛乳房炎无乳链球菌保护性抗原Sip亚单位疫苗的研究</p><p></p> /oa/darticle.aspx?type=view&id=20181015 &nbsp; <p>为研究无乳链球菌Fc-Sip亚单位疫苗的免疫效果,并验证IgG FcRn在奶牛乳腺发生局部免疫过程中的重要作用。本研究采用大肠杆菌原核表达系统,表达了由IgG FcRn介导无乳链球菌保护性表面抗原蛋白(Sip)的融合蛋白Fc-Sip ,并与佐剂混合制成Fc-Sip亚单位疫苗。选取干奶前15 d的奶牛进行加州乳房炎检测法(CMT)检测,选取120头CMT(++)以上的奶牛进行分组免疫。通过免疫前后的细菌分离试验、牛奶体细胞数测定、免疫牛血清抗体间接ELISA检测来评价该亚单位疫苗的免疫效果。结果显示,免疫前乳样细菌分菌率为86.6 %,无乳链球菌检出率为46.6 %;免疫后乳样分菌率降至40 %,无乳链球菌检出率降至13.3 %,表明Fc-Sip亚单位疫苗不但可以治疗无乳链球菌性奶牛乳房炎,还可以抑制其它奶牛乳房炎致病菌的侵入。首次免疫后60 d,免疫组80 %奶牛血清抗体滴度达到1∶2 048~1∶4 096,对照组奶牛抗体滴度一直保持在1∶512。首次免疫后90 d,使用利拉伐牛奶体细胞计数仪测定实验奶牛乳样中的体细胞数,免疫组奶牛乳样体细胞数范围在0.17×105个/mL~3.91×105个/mL,对照组奶牛乳样体细胞数的范围在4.05×105个/mL~7.27×105个/mL。免疫组奶牛血清抗体滴度的升高及免疫后牛奶中体细胞数的减少,表明该亚单位疫苗促进了奶牛体液免疫反应和局部免疫反应的发生,也证明该亚单位疫苗具有降低牛奶体细胞数的作用。 本研究为奶牛乳房炎无乳链球菌疫苗的研制奠定了基础。</p><p>  </p> 2018年11月15 00:00 2018年10 945 949 0 &nbsp; <p>李松建,周雅坪,吕天星,史晓娜,郭 婷,吴 倩,崔 琦,郝永清*</p> &nbsp; <p>马链球菌兽疫亚种IdeZ抗体降解酶特性研究</p><p></p> /oa/darticle.aspx?type=view&id=20181016 &nbsp; <p>本实验室前期研究通过基因组序列比对发现SEZ ATCC 35246株IdeZ基因与化脓链球菌抗体降解蛋白IdeS基因有较高同源性。为进一步了解马链球菌兽疫亚种(SEZ)中IdeZ基因编码蛋白的生物学功能及其可能在细菌抵抗吞噬过程中的作用,本研究利用pCold-SUMO重组系统表达可溶性重组蛋白IdeZ,采用体外模拟抗体降解的试验检测IdeZ蛋白降解IgG抗体的活性。结果显示,在37 ℃条件下,IdeZ蛋白表现出高效的抗体降解活性,体外反应10 min即可用SDS-PAGE检测到IgG降解产物;借助巨噬细胞Raw264.7细胞模型,体外模拟巨噬细胞吞噬SEZ试验检测IdeZ蛋白对抗体介导的巨噬细胞吞噬SEZ活性的影响,结果显示,IdeZ蛋白可有效抑制SEZ免疫小鼠血清或其纯化的IgG的吞噬功能。表明IdeZ蛋白有助于 SEZ抵抗巨噬细胞的吞噬功能。本研究为进一步揭示SEZ抵抗巨噬细胞吞噬机制提供了新的切入点。 </p><p>  </p> 2018年11月15 00:00 2018年10 950 955 0 &nbsp; <p>华承薇,彭 婕,欧阳雨晴,范红结,马 喆*</p> &nbsp; <p>猪传染性胃肠炎病毒血清抗体Dot-ELISA检测方法的建立</p><p></p> /oa/darticle.aspx?type=view&id=20181017 &nbsp; <p>为快速检测猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)抗体,本研究以原核表达系统串联表达的含有TGEV S蛋白抗原表位C的重组蛋白r-(C1C2)6为包被抗原建立TGEV血清抗体的Dot-ELISA检测方法。经反应条件优化结果显示,抗原最适包被量为62.5 ng/点;血清最佳工作浓度和工作时间分别为1∶80和45 min;羊抗猪 IgG-HRP最佳工作浓度和工作时间分别为1∶ 800和45 min;最适封闭条件分别为5 %脱脂乳37 ℃,45 min;血清和酶标抗体最适反应温度均为37 ℃;最佳显色时间7.5 min。结果显示该方法与猪轮状病毒和猪流行性腹泻病毒阳性血清无交叉反应,表明其具有良好的特异性。该方法对TGEV阳性血清最低检测限为1∶1 280。采用建立的Dot-ELISA对27 份临床猪血清样品进行检测,结果显示Dot-ELISA与TGEV/PRCV抗体检测试剂盒检测结果的符合率为92.6 %。本研究建立的Dot-ELISA检测方法简便、快速、灵敏、特异,适合用于TGE快速诊断。 </p><p> </p> 2018年11月15 00:00 2018年10 956 959 0 &nbsp; <p>于天飞<sup>1,2*</sup>,董慧莹<sup>1</sup>,张喜文<sup>1</sup>,谢鹏宇<sup>1</sup>,孙婉姝<sup>1</sup>,王有祺<sup>1</sup></p> &nbsp; <p>空肠弯曲菌CRISPR-Cas系统生物信息学分析</p><p></p> /oa/darticle.aspx?type=view&id=20181018 &nbsp; <p>为分析GenBank中登录的国内外空肠弯曲菌及其亚种中所含CRISPR-Cas系统的结构特征及同源关系,本研究利用生物信息学方法预测GenBank中已登录的空肠弯曲菌所含的CRISPR-Cas系统的基因序列,对其进行比对、保守性分析、RNA二级结构预测、重复序列的GC含量分析及其遗传进化分析。结果显示,空肠弯曲菌及其亚种中所含CRISPR-Cas系统的重复序列高度保守、GC含量较低(28.57 %以下),差异性主要呈现于两端游离部分;CRISPR中的间隔序列差异性较大致使CRISPR具有多态性;Cas蛋白序列同源性较高(96.8 %以上),遗传动态变化较低,与基因水平转移产生的趋同进化有潜在相关性。空肠弯曲菌CRISPR-Cas系统中的间隔序列具有多态性与该菌的遗传进化差异有关,重复序列及cas基因保守性较强,与其共同进化有潜在相关性。通过对不同空肠弯曲菌CRISPR-Cas系统生物信息学分析,为进一步研究该菌CRISPR-Cas系统结构特征、基因进化关系奠定了基础。 </p><p> </p> 2018年11月15 00:00 2018年10 960 964 0 &nbsp; <p>张 博<sup>1</sup>,姚学萍<sup>1,2*</sup>,曹随忠<sup>1,2</sup>,王 印<sup>1,2</sup>,杨泽晓<sup>1,2</sup></p> &nbsp; <p>α疱疹病毒潜伏感染研究进展</p><p></p> /oa/darticle.aspx?type=view&id=20181019 2018年11月15 00:00 2018年10 965 970 0 &nbsp; <p>向广韬,吴红霞,仇华吉*,孙 元* </p> &nbsp; <p>炎症小体调控宿主肠道菌群研究进展</p><p></p> /oa/darticle.aspx?type=view&id=20181020 2018年11月15 00:00 2018年10 971 975 0 &nbsp; <p>冯思薇?,陈婷婷?,雷桂花,蒋佳利,彭远义,方仁东*</p>