中国预防兽医学报 /oa 高通量测序一株天鹅源H5N8亚型流感病毒遗传演化分析 /oa/darticle.aspx?type=view&id=20180901 为研究一株天鹅源H5N8亚型禽流感病毒(AIV)的遗传演化规律,本研究对2016年从山西省疾控中心送检天鹅样品中分离到的一株H5N8亚型流感病毒(A/swan/Shanxi/6/2016)的全基因组序列进行高通量测序及遗传演化分析。结果显示,分离的病毒为Clade 2.3.4.4分支高致病禽流感病毒(HPAIV);BLAST分析显示该分离株的NP基因与H3N8亚型AIV的NP基因具有较高同源性,而其它基因节段则分别与来自其它国家的H5N8亚型AIV的相应基因节段同源性较高,进一步选取与各基因节段核苷酸同源性较高的病毒株作参考序列构建其系统进化树,推测该分离株为一株重组病毒株。特殊氨基酸位点分析显示,其具有典型的禽型受体结合位点和典型的人型受体结合位点。并且M1蛋白、NS1蛋白和PB2蛋白具有H5N1亚型AIV对鼠致病性增强的分子标志,提示该株野鸟源流感病毒可能具备感染哺乳动物的能力。本研究对H5N8亚型AIV的综合防控具有一定的指导意义。<br />   2018年09月17 00:00 2018年09 771 774 0 &nbsp; <p>赵 璐<sup>1</sup>,刘建文<sup>2</sup>,李月辉<sup>2</sup>,昝亚楠<sup>1</sup>,李玉磊<sup>1</sup>,刘丽娜<sup>1</sup>,刘丽玲<sup>1</sup>,田国彬<sup>1</sup>,<br />曾显营<sup>1</sup>,李雁冰<sup>1*</sup>,陈化兰<sup>1<br /></sup></p> 广西边境地区家禽H9亚型流感病毒调查 /oa/darticle.aspx?type=view&id=20180902 为了解中越边境地区H9亚型禽流感病毒(AIV)的流行情况,本研究收集2012年12月~2015年12月广西边境地区主要活禽市场和养殖场的家禽拭子及环境样品,采用病原分离和鉴定方法对样品进行了分析。结果显示,H9亚型AIV整体分离率为3.01 %,其中冬春季节(3.47 %)高于夏秋两季(1.39 %);市场样品的病毒分离率(3.73 %)高于养殖场(1.53 %);在鸡、鸭、鹅源样品中均能检测到H9亚型AIV,其中鸡源样品的H9亚型AIV分离率最高(7.68 %),鹅次之(1.43 %)。本研究表明,H9亚型AIV在广西边境地区表现出一定的时间、空间和群间分布特征。本研究对H9亚型AIV进行跟踪监测可为预防和控制禽流感提供重要的流行病学信息。<br />   2018年09月17 00:00 2018年09 775 778 0 &nbsp; <p>莫胜兰,尹彦文,施开创,李 军,梁 媛,屈素洁,粟艳琼,胡 杰,陆文俊,邹联斌<sup>*<br /></sup></p> 携带分子标记的PCV1-2嵌合病毒的构建及其生物学特性的初步分析 /oa/darticle.aspx?type=view&id=20180903 为构建携带分子标记的PCV1-2嵌合病毒,本研究通过基因工程技术将V5标签引入PCV2的ORF2末端,以ORF2-V5替换PCV1的ORF2后克隆于pcDNA3.1(+)载体中,构建pcDNA-PCV1-2m-V5。为检验pcDNA-PCV1-2m-V5的体外感染性,将其转染PK-15细胞后,采用IPMA、RT-PCR等技术进行检测,结果显示:pcDNA-PCV1-2m-V5具有感染性。采集已注射pcDNA-PCV1-2m-V5质粒的小鼠血清接种于PK-15细胞,应用细胞试验、PCR技术、IFA、western blot及电镜等试验对嵌合病毒进行鉴定。结果显示:在小鼠体内拯救出PCV1-2m-V5嵌合病毒,且V5标签的引入能够很好地区分嵌合病毒和亲本病毒产生的Cap蛋白。本实验可为PCV2的感染性DNA (iDNA)疫苗研发提供素材和参考。<br />   2018年09月17 00:00 2018年09 779 784 0 &nbsp; <p>徐 国,代振江,曾智勇*,梁海英,汤德元,王 彬,黄 涛,叶百川,张爱琼,何小莉,咸 文<br /></p> 鸡白痢沙门菌htrA基因缺失株的构建及其<br />相关生物学特性研究 /oa/darticle.aspx?type=view&id=20180904 为研究丝氨酸蛋白酶HtrA对鸡白痢沙门菌在巨噬细胞内生存的影响,本研究利用 λ-Red 同源重组系统构建了鸡白痢沙门菌(ATCC19945) htra基因缺失突变株(ATCC19945Δhtra),通过测定其巨噬细胞内存活能力、应激条件实验,探究HtrA蛋白在鸡白痢沙门菌致病过程中的作用。结果显示,缺失株ATCC19945Δhtra与野生型菌株和回复菌株相比,其生长速度、生化特性无明显差异,但其巨噬细胞内存活能力显著降低。应激环境试验结果表明,htra基因缺失后鸡白痢沙门菌对pH、热和H2O2氧化应激的敏感性增加,在蛋清中生存能力下降,生物被膜形成能力显著下降。本研究为进一步阐释鸡白痢沙门菌的胞内存活机制、疫苗开发奠定基础。<br />   2018年09月17 00:00 2018年09 785 789 0 &nbsp; <p>张志强<sup>1,3,4</sup>,杨 楠<sup>4</sup>,苏硕青<sup>4</sup>,李永慧<sup>2</sup>,黄翠琴<sup>3</sup>,段滇宁<sup>3</sup>,吴同垒<sup>4</sup>,李佩国<sup>4*</sup>,<br />朱国强<sup>1*<br /></sup></p> 牛荚膜A型多杀性巴氏杆菌免疫攻毒模型的建立 /oa/darticle.aspx?type=view&id=20180905 牛荚膜A型多杀性巴氏杆菌(Pm)是典型的条件致病菌,为建立该病原菌的免疫攻毒模型,本研究采用不同代次、不同剂量的Pm-TJ株接种实验动物小鼠和本动物牛,测定其对小鼠的最小致死剂量以及对牛的最小感染剂量;在此基础上,将制备的全菌体灭活疫苗分别免疫小鼠和牛,通过攻毒保护试验评价该疫苗对动物的免疫原性。攻毒试验结果显示,Pm-TJ株对小鼠高度致死,最小致死剂量为10 cfu,而且不同代次细菌的毒力无显著差异,表明其在体外传代过程中毒力保持稳定;能够引起Pm-TJ株接种牛典型的纤维素性化脓性肺炎,而且接种牛的发病率呈现剂量依赖性,最小感染剂量为2.5×108 cfu。免疫后攻毒试验结果显示,将含有1×107 cfu灭活菌体的疫苗接种小鼠,其能够抵抗致死剂量细菌的攻击;用含有7.5×109 cfu灭活菌体的疫苗接种犊牛,用两倍最小感染剂量细菌攻击,免疫牛能够获得有效保护。本研究利用实验动物小鼠和本动物牛建立了牛荚膜A型Pm的免疫攻毒模型,并表明该全菌体灭活疫苗具有良好的免疫原性,这些研究结果为Pm疫苗的研发奠定了实验基础。<br />   2018年09月17 00:00 2018年09 790 794 0 &nbsp; <p>姜志刚<sup>1</sup>,徐和敏<sup>2</sup>,邵 葳<sup>2</sup>,潘春刚<sup>2</sup>,于 力<sup>1*<br /></sup></p> 基于鸡毒支原体热休克蛋白DnaK的间接ELISA方法的评价及初步应用 /oa/darticle.aspx?type=view&id=20180906 为研究鸡毒支原体(MG)重组热休克蛋白DnaK (rDnaK)的免疫反应原性及其作为ELISA方法中诊断抗原的应用价值,本研究将已构建的含有MG DnaK基因的重组质粒pET-30a-DnaK进行原核表达纯化,以多份MG的标准阳性血清和阴性血清作为一抗,进行western blot分析,结果显示rDnaK与MG的阳性血清发生特异性反应,与MG的阴性血清无反应条带,表明rDnaK具有较好的免疫反应原性。将其作为包被抗原包被酶标板,用HRP标记的兔抗鸡IgG作为酶标二抗,分别对抗原包被浓度、血清稀释度、酶标二抗稀释度及工作时间等反应条件进行了优化,建立了一种稳定检测MG抗体的间接ELISA方法。对该方法进行评估,灵敏性试验结果显示该方法与进口试剂盒相当;特异性试验结果显示包被抗原rDnaK不与NDV、IBV、ILTV等几种常见的禽呼吸道疾病的阳性血清发生交叉反应;重复性试验结果显示,批内变异系数为1.6 %~5.15 %,批间变异系数为2.9 %~5.98 %;符合率试验结果显示该方法与进口试剂盒的总体符合率为90.4 %;抗体持续期试验结果显示该方法最早能在鸡群免疫MG疫苗后一周检测到MG抗体,表明该诊断方法适用于MG感染的早期检测。采用该方法检测了来自全国5个省份的568份临床样品,其结果显示MG的感染率在23 %~51 %,对我国MG的流行状况做了初步的调查。<br />  2018年09月17 00:00 2018年09 795 800 0 &nbsp; <p>王莉莉<sup>1</sup>,于艳超<sup>2</sup>,周长平<sup>1</sup>,赵雅芝<sup>2</sup>,潘 巧<sup>1</sup>,张 琳<sup>1</sup>,郝文君<sup>1</sup>,王秀梅<sup>1*</sup>,<br />辛九庆<sup>1*<br /></sup></p> 猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒和猪轮状病毒A多重荧光定量<br />RT-PCR检测方法的建立 /oa/darticle.aspx?type=view&id=20180907 为对引起腹泻症状的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪轮状病毒A(PRoVA) 3种病毒同时快速地鉴别检测,本研究对GenBank中登录的TGEV的S基因、PEDV的S基因、PRoVA的NSP基因进行序列分析,分别设计了针对3种病毒的特异性引物和用3种荧光基团标记的核酸探针,通过条件优化建立了针对这3种病毒的多重荧光定量RT-PCR方法。结果显示,该方法能够特异性检测PEDV、TGEV和PRoVA,而与其它病原无交叉反应;对TGEV、PEDV和PRoVA的最低检测量分别为1.12 拷贝/μL、39 拷贝/μL和25 拷贝/μL;组内和组间变异系数均小于5 %;该方法与商品化的试剂盒检测结果符合率达100 %。该方法快速、敏感,检测结果准确可靠,为猪病毒性腹泻疾病的流行病学调查和分子生物学快速诊断奠定了基础。<br />   2018年09月17 00:00 2018年09 801 805 0 &nbsp; <p>李 军<sup>1</sup>,蔡良语<sup>2</sup>,陈 兵<sup>3</sup>,刘建利<sup>3</sup>,孙 洁<sup>3</sup>,陈书琨<sup>3</sup>,林庆燕<sup>3</sup>,陶 虹<sup>3</sup>,<br />吴绍强<sup>4</sup>,卢体康<sup>3</sup>,陈金顶<sup>1</sup>,秦智锋<sup>3*<br /></sup></p> 副猪嗜血杆菌新型微量凝集试验抗体检测方法的建立 /oa/darticle.aspx?type=view&id=20180908 为建立国内流行血清型副猪嗜血杆菌的新型微量凝集试验抗体检测方法(MAT),本研究以副猪嗜血杆菌4型、5型、12型和13型为抗原,分别对其MAT方法进行了最佳反应条件筛选、特异性、敏感性和重复性试验,以及疫苗免疫样品和临床样本检测。MAT试验结果显示,4型、5型、12型和13型凝集抗原的最佳反应浓度介于1.5×109 cfu/mL~2.0×109 cfu/mL,最佳反应温度37℃,最佳反应时间为6 h~8 h。4种型的MAT方法对猪巴氏杆菌病等6种细菌性疾病和猪瘟等5种病毒性疾病阳性血清的检测结果均为阴性,4种方法之间有轻微的交叉反应,但其抗体效价均不高于1∶4 (阴性临界值)。4种型的MAT方法比相应试管凝集方法的敏感性提高了2~4倍,重复性试验结果显示该方法检测副猪嗜血杆菌4种型变异系数均小于10 %,重复性良好。利用该方法检测临床样品,并与国家标准套式PCR方法对比,结果显示二者阳性符合率为82.1 %。疫苗免疫抗体检测结果显示,4种型的MAT方法均能检测到商品化疫苗免疫猪14 d的血清抗体,可用于疫苗免疫的抗体评价。对临床样品的检测结果显示,断奶仔猪、保育仔猪和经产母猪的总阳性率分别为12.3 %、49.3 %和69.8 %,提示保育期仔猪的合群可能导致了猪群的大量感染。本研究为副猪嗜血杆菌病的疫苗抗体评价和流行病学监测提供了一种简便经济可行的方法。<br />   2018年09月17 00:00 2018年09 806 811 0 &nbsp; <p>薛 云<sup>1,2</sup>,王 乐<sup>2</sup>,王 臣<sup>2</sup>,赵朋超<sup>1</sup>,司丽芳<sup>2</sup>,赵战勤<sup>1,2*<br /></sup></p> 肺炎亚种多重PCR检测方法的建立 /oa/darticle.aspx?type=view&id=20180909 为同时快速检测绵羊肺炎支原体(Mo)、丝状支原体山羊亚种(Mmc)和山羊支原体山羊肺炎亚种(Mccp),本研究根据Mo的P80基因,Mmc的MLC_1760和Mccp的arcA基因序列,设计合成了3对特异性引物,建立了同时检测Mo、Mmc和Mccp的多重PCR方法。该方法可以同时扩增出Mo、Mmc和Mccp的特异性片段,而对大肠杆菌、巴氏杆菌、羊传染性脓疱病毒等常见羊病病原无交叉反应,对Mo、Mmc和Mccp的最低检出量分别为3.62×104拷贝/μL、4.03×105拷贝/μL和6.78×105拷贝/μL。应用该方法对75份临床样品进行检测,结果与单一PCR检测结果一致。对32份临床样品同时用该多重PCR方法与分离鉴定法进行检测,结果显示,两种方法对Mo、Mmc、Mccp的检测符合率分别为87.5 %、100 %、100 %。本研究建立的多重PCR方法特异性强、敏感性较高,适用于Mo、Mmc和Mccp临床快速检测及流行病学调查。<br />   2018年09月17 00:00 2018年09 812 817 0 &nbsp; <p>林裕胜,江锦秀,江 斌,游 伟,胡奇林*<br /></p>